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https://doi.org/10.19137/cienvet.v28.9805
ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
Aislamiento y caracterización de Brucella abortus biovar 1 en fetos abortados de rodeos bovinos de la Provincia de Buenos Aires, Argentina
Isolation and characterization of Brucella abortus biovar1 in aborted foetuses from cattle herds in the Province of Buenos Aires, Argentina
Isolamento e caracterização de Brucella abortus biovar 1 em fetos abortados de rebanhos bovinos na Província de Buenos Aires, Argentina
Koval A1https://orcid.org/0009-0003-4392-3948, Iriarte M2 https://orcid.org/0009-0003-7926-5342, Fanti S2 https://orcid.org/0009-0008-4077-9721, Cillero M2, https://orcid.org/0009-0006-4810-5372, Collova V2 https://orcid.org/0009-0005-8095-7563, Franco C 3 https://orcid.org/0009-0003-0917-3303, Coppola L3 https://orcid.org/0009-0008-2626-3948, Fabeiro M3 https://orcid.org/0009-0002-8335-9707, Elena S3 https://orcid.org/0000-0002-2694-8276
1 Biogénesis Bagó, Ruta Panamericana Km 38.5, Garín, Buenos Aries.
2 Laboratorio Azul Diagnóstico, 25 de mayo 479, Azul, Buenos Aries.
3 Dirección General de Laboratorios y Control Técnico, Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA). Talcahuano 1669, Martínez (CP1640), Buenos Aries.
Correo electrónico: selena@senasa.gob.ar
Fecha de recibido: 10 de marzo de 2026 Fecha de aceptado para su publicación: 16 de junio de 2026
Resumen
Durante el año 2025, el Laboratorio Azul recibió un total de 68 fetos bovinos abortados procedentes de diferentes rodeos de la Provincia de Buenos Aires para diagnóstico etiológico. En 7 de ellos, originarios de los partidos de Alvear, Lamadrid, Benito Juárez, Ayacucho y Tapalqué, se detectó y aisló Brucella spp. a partir de muestras de líquido abomasal y pulmón. La detección inicial se realizó mediante inmunofluorescencia directa y coloración de Stamp,
seguida de cultivo en medios selectivos. Los aislamientos fueron remitidos al Departamento de Brucelosis del SENASA, donde se confirmó mediante pruebas bioquímicas y PCR multiplex que correspondían a Brucella abortus biovar 1 de campo, descartándose la participación de las cepas vacunales S19 y RB51. Estos hallazgos evidencian la circulación activa de B. abortus en rodeos de cría de la región pampeana, a pesar de la implementación del Plan Nacional de Control y Erradicación
Palabras clave: Brucella abortus, brucelosis, biovar
Abstract
During 2025, the Azul Laboratory received a total of 68 aborted bovine foetuses from different herds in the Province of Buenos Aires for etiological diagnosis. In 7 of them, originated from the districts of Alvear, Lamadrid, Benito Juárez, Ayacucho, and Tapalqué, Brucella spp. was detected and isolated from abomasal fluid and lung samples. Initial detection was performed using direct immunofluorescence and Stamp staining, followed by culture on selective media. The isolates were sent to the Brucellosis Department of SENASA, where they were confirmed by biochemical tests and multiplex PCR as belonging to Brucella abortus biovar 1 field strains, ruling out the involvement of the vaccine strains S19 and RB51. These findings demonstrate the active circulation of B. abortus in breeding herds in the Pampas region, despite the implementation of the National Control and Eradication Plan
Keywords: Brucella aborus, brucellosis, biovar1
Resumo
Durante o ano de 2025, o Laboratório Azul recebeu um total de 68 fetos bovinos abortados de diferentes rebanhos da Província de Buenos Aires para diagnóstico etiológico. Em 7 desses fetos, originários dos distritos de Alvear, Lamadrid, Benito Juárez, Ayacucho e Tapalqué, Brucella spp. foi detectada e isolada em amostras de fluido abomasal e pulmão. A detecção inicial foi realizada por meio de imunofluorescência direta e coloração de Stamp, seguida de cultura em meios seletivos. Os isolados foram enviados ao Departamento de Brucelose do SENASA, onde testes bioquímicos e PCR multiplex confirmaram que correspondiam à Brucella abortus biovar 1 isolada em campo, descartando o envolvimento das cepas vacinais S19 e RB51. Esses achados demonstram a circulação ativa de B. abortus em rebanhos reprodutores na região dos Pampas, apesar da implementação do Plano Nacional de Controle e Erradicação
Palavras-chave: Brucella abortus, brucelose, biovar
Introducción
La brucelosis bovina es una enfermedad zoonótica producida por Brucella abortus, que tiene consecuencias tanto a nivel productivo como en la salud pública.(1,2) En los bovinos provoca abortos en el último tercio de la gestación, generalmente por única vez, infertilidad, disminución del potencial productivo de los animales crónicamente infectados que, si no son eliminados del rodeo, mantienen la bacteria la cual va a ser eliminada masivamente con cada parto, contaminando el ambiente, infectando a nuevos animales en cada temporada y perpetuando la infección.(3,4)
En los humanos produce una infección crónica que, de no ser detectada y tratada a tiempo, puede resultar invalidante. Episodios de fiebre ondulante, con alta temperatura y fuertes dolores musculares, sudoración, dolor de cabeza, inflamación de las articulaciones y ganglios linfáticos, cansancio, pérdida de peso y falta de apetito suelen ser los signos más comunes en personas infectadas. (5)
Es considerada una enfermedad profesional, que afecta a trabajadores rurales y de la industria frigorífica (6) y a médicos veterinarios, expuestos a material infeccioso durante maniobras obstétricas, atención de partos o tactos. (7,8,9)
La vacunación obligatoria y masiva de las terneras entre los 3 y 8 meses de edad en Argentina (10) con vacuna elaborada con cepa 19, ha sido y es la herramienta más segura y probada para aumentar la resistencia a la infección, disminuir las tasas de abortos y bajar la prevalencia de la enfermedad. Sin embargo, debe ser complementada con el análisis serológico y eliminación de los animales positivos. (11) La combinación de estas herramientas ha permitido la erradicación de la enfermedad en muchos establecimientos, regiones y países.
El objetivo de este trabajo fue describir la metodología y analizar los aislamientos de Brucella spp obtenidos en Laboratorio Azul durante el año 2025
Materiales y Métodos
Procedencia
Los fetos analizados, incluidos en el presente estudio, fueron remitidos refrigerados al Laboratorio Azul por Médicos Veterinarios de la actividad privada. Todos procedentes de rodeos de cría ubicados en los partidos de Alvear, Lamadrid, Benito Juárez, Ayacucho y Tapalqué de la Provincia de Buenos Aires, para la investigación de agentes causales de abortos.
Necropsia y toma de muestras
En todos los casos se realizó análisis anatomopatológicos macroscópico y microscópico. Se recolectaron muestras de contenido de abomaso, exudado de cavidades, contenido intracardiaco, pulmón, hígado, riñón, bazo, corazón, linfonódulo mesentérico y sistema nervioso central para la investigación de los diferentes patógenos.
Inmunofluorescencia directa (IFD) para Brucella spp
Se realizaron improntas delgadas de líquido de abomaso y pulmón, las mismas fueron secadas a temperatura de laboratorio y fijadas en acetona a – 20 °C durante 15 minutos. A cada impronta se le añadieron 20 µL de conjugado anti-Brucella marcado con isotiocianato de fluoresceína, desarrollado por el Laboratorio Azul y utilizado en una dilución 1:30. Posteriormente, las muestras se incubaron a 37 °C en cámara húmeda durante 45 minutos. Finalizada la incubación, se efectuó un lavado durante 5 minutos en agua destilada. Secados los preparados, se agregó una gota de glicerina bufferada y se cubrió con un cubreobjetos. Se realizó la observación en microscopio de inmunofluorescencia con objetivo de inmersión de100 X (Carl Zeiss).
Coloración de Stamp
Las muestras que resultaron positivas a la inmunofluorescencia (contenido de abomaso y pulmón) fueron verificadas mediante la coloración de Stamp (12) para asegurar la especificidad de la IFD.
Cultivo y aislamiento
Las muestras de líquido de abomaso y pulmón se sembraron en agar Brucella (BD Difco) y agar sangre y se incubaron en una jarra con vela (aproximadamente con 5% de CO₂). También se sembraron en placas de agar Skirrow (Biokar Diagnostics) (13) con suplemento selectivo (Oxoid), así como en agar sangre; estas últimas se incubaron a 37 °C durante 3 días en una jarra con un sobre generador de atmósfera microaerófila (CampyGen, Thermo Scientific). Finalmente, los aislamientos obtenidos fueron remitidos en condiciones de bioseguridad al Departamento de Brucelosis de SENASA para la realización de pruebas bacteriológicas y moleculares.
Identificación y pruebas bacteriológicas
Las colonias aisladas fueron examinadas mediante transiluminación oblicua, prueba de acriflavina y actividad ureásica. Para establecer el biovar se realizaron las pruebas bioquímicas de producción de ácido sulfhídrico, desarrollo en presencia de colorantes (tionina, fucsina y safranina; Sigma-Aldrich) y aglutinación con sueros policlonales monoespecíficos (sueros anti-antígenos A y M) elaborados en SENASA. Durante las pruebas de identificación, se utilizaron cepas referencia de B. abortus biovar 1, B. suis biovar 1 (1330) y B. melitensis biovar 1, procedentes de la colección de cultivos del SENASA. Las técnicas bacteriológicas, se realizaron siguiendo los procedimientos estándar (12) (Alton et al, 1988).
Extracción de ADN y PCR Multiplex (Bruce-ladder)
Se resuspendieron las colonias aisladas en 500 μL de agua grado biología molecular. La extracción del material genómico se realizó mediante shock térmico en un termobloque (Thermocell Cooling & Heating – HB 202. BIOER. China) a 95 ºC, durante 10 min con posterior enfriamiento a 4 ºC. A continuación, se realizó una centrifugación de 10 min a 8000 rpm para producir el precipitado de los restos celulares y la obtención del sobrenadante como templado (ADN) para la realización de la técnica PCR Multiplex. Este procedimiento también se realizó para las cepas de vacunas B. abortus S19 y RB51 y B. suis 1330 utilizadas como control. El ADN extraído se conservó a -20 ºC. La amplificación de ácidos nucleicos se realizó siguiendo el procedimiento descripto por López-Goñi et al. 2008(14) con modificaciones. Para llevar a cabo las diferentes reacciones de amplificación se utilizó un termociclador (Thermal Cycler 2720 – Applied Biosystems. Singapore), los productos de amplificación fueron sembrados en geles de agarosa al 2 %, teñidos con Bromuro de Etidio (BioBasicINC., solución 10 mg/ml) y sometidos a corridas electroforéticas durante 30 min a 80 V. Se utilizaron cubas electroforéticas (Wide Mini-Sub Cell GT – BIORAD. Argentina). Los geles fueron visualizados utilizando un transiluminador de luz UV (Macro Vue UV-20 – Hoefer Pharmacia Biotech. San Francisco CA, USA).
Resultados
Hallazgos anatomopatológicos macroscópicos
En 2/7 fetos se observó fibrina en cavidad abdominal, torácica y consolidación pulmonar. En los 5 fetos restantes no se observaron lesiones macroscópicas relevantes.
Hallazgos anatomopatológicos microscópicos
En sistema nervioso central se observó gliosis nodular multifocal moderada. A nivel pulmonar bronconeumonía histiocítica difusa severa con pleuritis no supurativa y trombosis. En corazón epicarditis histiocítica difusa leve a moderada. En hígado hepatitis histiocítica portal aleatoria multifocal moderada.
Inmunofluorescencia directa
Se observaron cocobacilos con fluorescencia de intensidad variable en las muestras analizadas de los 7(siete) fetos (Foto 1).
Foto1: Inmunofluorescencia directa en líquido de abomaso. Se aprecian abundantes estructuras cocobacilares con fluorescencia verde (Aumento 100x).
Cultivo y aislamiento
En los 7 fetos remitidos se aislaron cepas de Brucella spp. en las 2 condiciones de incubación descriptas. (Foto 2)
Foto 2: Aislamiento de Brucella spp. en medio selectivo Skirrow a partir de líquido abomasal. Se aprecia la eficacia del medio para permitir el crecimiento de colonias color ámbar pálido, manteniendo la transparencia y el brillo característico.
Tipificación bacteriológica
La tipificación mediante métodos bacteriológicos clásicos, específicamente el perfil de crecimiento en colorantes, permitió identificar las cepas aisladas como Brucella abortus Biovar1 (Foto 3)
Biovar1 (Foto 3)
Foto 3. Pruebas de crecimiento en presencia de colorantes: (a) control en agar triptosa, (b) tionina, (c) fucsina básica y (d) safranina. Referencias: 4 cepa control B. abortus bv. 1; 5 y 6: aislamientos analizados. Nótese la inhibición del desarrollo en el medio con tionina (b) y el crecimiento satisfactorio en fucsina (c) y safranina (d), perfil compatible con B. abortus bv. 1.
Identificación molecular
La técnica de PCR Multiplex permitió la tipificación en un solo paso de las cepas de B. abortus, amplificando los fragmentos de 1682 pb., 794 pb., 587 pb., 450 pb. y 152 pb. correspondiendo este perfil a B. abortus de campo, diferenciándose de las cepas vacunales S19, que no produce el fragmento de 587 pb y RB51, la cual se diferencia por la ausencia de los fragmentos de 1682 y 1320 pb. como así también por un fragmento adicional de 2524 pb. (Foto 4).
Foto. 4. Tipificación Bruce-ladder: Calle 1: Marcador de peso molecular de 100 pb., Calle 2: Cepa correspondiente a B. abortus cepa vacunal S19. Calle 3: B. abortus cepa vacunal RB51. Calles 4 a 7: Cepas de B. abortus aisladas en fetos bovinos. Calle 8: Marcador de peso molecular de 1kpb. Calles 9 a 11: Cepas de B. abortus aisladas en fetos bovinos. Calles 12 y 13: Cepas utilizadas como controles positivos de B. suis. Calle 14: Control negativo de extracción. Calle 15: Control negativo de pcr.
Discusión
La IFD resultó una técnica rápida, sencilla, con muy buena correlación con la coloración de Stamp y el cultivo. Todas las cepas desarrollaron en los tres medios de cultivo (agar sangre, agar brucella y Skirrow) y en las dos condiciones de incubación, mostrando un mejor desarrollo en los medios selectivos (agar brucella y Skirrow) y una mayor velocidad de crecimiento en la jarra con sobre de atmósfera microarófila (incubación a 37 grados durante 72 horas). El cultivo en agar Skirrow en condiciones de microaerofilia resultó muy efectivo para el aislamiento de Brucella.
La tipificación bacteriológica permitió identificar los aislamientos como pertenecientes al biovar 1 de Brucella abortus, históricamente el más frecuente en Argentina, aunque también se ha reportado el biovar 2. (15)
La PCR Multiplex resultó una herramienta muy útil para descartar la participación de cepas vacunales (RB 51 y S19) en los abortos.
Conclusiones
Sobre los 68 fetos bovinos remitidos al laboratorio para diagnostico etiológico, el 10.3 % resultaron positivos a Brucella abortus, lo cual refleja el alto nivel de circulación de esta bacteria en los rodeos bovinos.
Los métodos bacteriológicos y bioquímicos tradicionales complementados con técnicas moleculares permitieron identificar las cepas aisladas como B. abortus biovar 1.
La caracterización molecular demostró que no estaban involucradas las cepas vacunales (cepa 19 o RB51) en la generación de los abortos.
A pesar de la implementación del Plan Nacional de Control y Erradicación de Brucelosis Bovina por parte del SENASA, que incluye la vacunación de todas las terneras entre los 3 y 8 meses de edad, y los monitoreos serológicos establecidos, la brucelosis continúa siendo una de las principales enfermedades que afecta la reproducción en los rodeos bovinos de nuestro país.
Bibliografía
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Agradecimiento
Al Dr. Luis Fazzio por los aportes realizados en este artículo
Declaraciones
Conflicto de intereses
Los autores declaran que no existen conflictos de interés respecto de la publicación del presente trabajo.
Contribuciones de autores
Todos los autores contribuyeron a la concepción y el diseño del estudio. La preparación del material, la recopilación y el análisis de datos fueron realizados por los mismos. El primer borrador del manuscrito fue escrito por Ariel Koval y todos los autores comentaron las versiones anteriores del manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final. Supervisión: Sebastian Elena.
